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如何有效避免细胞培养房微生物污染问题

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由于体外培养细胞自身没有抵抗污染的能力,而且培养基中的抗生素抗污染能力有限,因而培养细胞一旦发生污染多数将无法挽回。细胞污染早期或污染程度较轻时,如果能及时去除污染物,部分细胞有可能恢复、但是当污染物持续存在培养环境中,轻者细胞生长缓慢,分类象减少,细胞变得粗糙,轮廓增强细胞浆出现颗粒、污染较严重,细胞增值停止,分裂象消失,细胞质中出现大量堆积物,细胞变圆、脱壁。

       微生物污染中以真菌最多,真菌种类繁多,形态各异,但是污染后易于发现,大多呈白色或浅黄色小点漂浮于培养液表面,肉眼可见;有的散在生长,镜下可见呈丝状、管状、树枝状,纵横交错穿行于细胞之间。念珠菌和酵母菌卵圆形,散在细胞周边和细胞之间生长。真菌生长迅速,能在短时间内抑制细胞生长、产生有毒物质杀死细胞。抗真菌制剂对预防和排除真菌污染有效。
真菌污染问题:
      真菌污染是细胞培养过程中最常见的一种,尤其在霉雨季节进行细胞培养更易污染。最常见的真菌有烟曲霉、黑曲菌、孔子霉、毛霉菌、白色念珠菌和酵母菌。

污染途径及污染物:
空气:空气是微生物及尘埃颗粒传播的主要途径。空气流动性大,如果培养操作场地于外界隔离不严格或消毒不充分,外界不洁空气很容易进入造成污染。因此,培养设施不能设在通风场所。无菌操作应在净化台内进行,工作时要带口罩,以免因讲话、咳嗽等使外界污染进入操作面,造成污染。  器材:各种培养器皿、器械消毒不彻底和洗刷不干净导致污染,另外需要对培养箱进行定期消毒,防止形成污染  操作:实验操作无菌观念不强,技术不熟练,使用污染的器皿或封瓶不严等,都可以造成污染。培养两种细胞以上时,操作不规范,交叉使用吸管或培养液、瓶等有可能导致细胞交叉污染。 血清:有些血清在生产时就已经被支原体或病毒等污染,变成了污染。 组织样本:原代培养的污染多数来源于组织样本;取材时碘酒消毒后脱碘不彻底,可造成碘混入组织,细胞或培养液中,影响细胞生长。

如何有效避免微生物污染问题呢?
1、重视细胞房管理工作,规范操作  定期进行细胞房清洁消毒工作,规范实验人员操作(如身着白大褂、换鞋等),创造洁净培养环境。  2、避免频繁查看细胞  做好实验规划,减少培养箱门开关的频率,取放细胞时需佩戴洁净的手套,并用少量的 70% 医用酒精(过多会导致培养箱中残留乙醇蒸汽)擦拭培养瓶/皿表面,从而降低细胞培养箱污染的风险; 3、期维护和灭菌,预防污染  定期清洁维护,培养箱内用水灭菌后使用并定期更换,选择培养箱时,可优先考虑有自动灭菌功能的培养箱。细胞房一旦发生污染,及时进行消毒灭菌工作。


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